Ciencias de la salud
Artículo Científico
Desinfección
del hidrocoloide irreversible contaminado con Staphylococcus aureus y Cándida
albicans al mezclarse con clorhexidina al 0,12%
Disinfection
of irreversible hydrocolloid contaminated with Staphylococcus Aureus and
Candida Albicans with 0.12% chlorhexidine
Desinfecção
do hidrocolóide irreversível contaminado com Staphylococcus aureus e Candida
albicans ao misturar-se com clorexidina 0,12%
Jenny K.
Collaguazo-Artos ᶦ
jennysline01@hotmail.com
Juan
A. Viteri-Moya ᶦᶦ
javiteri@uce.edu.ec
Alexie
E. Izquierdo-Bucheli ᶦᶦᶦ
eizquierdo@uce.edu.ec
Recibido:
12 de noviembre de 2016 *
Corregido: 11 de diciembre de 2016 * Aceptado: 13 de enero de 2017
ᶦOdontóloga, Facultad de
Odontología, Universidad Central del Ecuador, Quito, Ecuador.
ᶦᶦDocente,
Facultad de Odontología, Universidad Central del Ecuador, Quito, Ecuador.
ᶦᶦᶦDocente,
Facultad de Odontología, Universidad Central del Ecuador, Quito, Ecuador.
Resumen.
La impresión dental al entrar
en contacto con saliva y en ocasiones sangre del paciente, está expuesta a
patógenos responsables de contagio. Objetivo: El propósito del presente
proyecto fue determinar la efectividad en la desinfección del hidrocoloide
irreversible o alginato, contaminado con Staphylococcus aureus y Cándida
albicans al mezclarse con clorhexidina al 0,12%. Materiales y Método: Estudio
experimental, in vitro y comparativo, la muestra fue de 40 discos de alginato, divididos en 2 grupos de estudio (n=20).
Se procedió a elaborar discos de alginato utilizando para ello clorhexidina al
0,12% y agua destilada estéril para la prueba control. Los microorganismos indicadores de desinfección son
Staphylococcus aureus y Cándida albicans, los cuales fueron inoculados a 37 y
25 °C por 24 y 72 horas, respectivamente. Para el análisis de datos se utilizó
el programa Microsoft Excel 2013 y el paquete estadístico SPSS statistics 23.0,
se aplicó el test ANOVA de un factor. Resultados: Los discos de alginato elaborados con la
sustancia desinfectante presentaron un halo de inhibición promedio de 2,85 mm
en presencia del Staphylococcus aureus y 3,45 mm con Cándida albicans, a
comparación de los formados por el
grupo control que fueron de 0,05 mm
con los dos microorganismos. Conclusión: La efectividad desinfectante en el hidrocoloide irreversible
mezclado con clorhexidina al 0,12% después de ser contaminado con una bacteria y un hongo, es de grado 5 de
acuerdo a la escala de inhibición, lo que indica un nivel de desinfección
moderado.
Palabras clave: Desinfección; hidrocoloide irreversible; alginato;
Clorhexidina; Staphylococcus aureus; Cándida albicans.
Abstract.
Dental impression upon contact with saliva and sometimes, patient's
blood, is exposed to pathogens Objective: The purpose of this project
was to determine the effectiveness of disinfection of irreversible hydrocolloid
or alginate, contaminated with Staphylococcus aureus and Candida albicans with
0.12% chlorhexidine. Materials and Methods: This is an In vitro and comparative
experimental study with a 40 alginate disks sample, divided into 2 study groups
(n = 20). Alginate disks were made using 0.12% chlorhexidine and sterile
distilled water as controls. Disinfection microorganisms are Staphylococcus
aureus and Candida albicans, which were inoculated at 37 and 25 ° C for 24 and
72 hours. For data analysis we used
Microsoft Excel 2013 statistical package SPSS statistics 23.0 ANOVA test. Results:
Alginate disks made with disinfectant substance had a halo of 2.85 mm in presence
of Staphylococcus aureus and 3.45 mm with Candida albicans, compared to those
formed by the control group which were 0, 05 mm with the two microorganisms. Conclusion:
The disinfectant effectiveness in the irreversible hydrocolloid mixed with
0.12% chlorhexidine after being contaminated with a bacterium and a fungus, is
a degree 5 according to the inhibition scale, with a moderate disinfection level.
Keywords: Disinfection; Irreversible hydrocolloid; Alginate;
Chlorhexidine; Staphylococcus aureus; Candida albicans.
Resumo.
A Impressão dentária quando entrar em contato com a saliva ou sangue do
paciente é exposta a agentes patogênicos responsáveis de infecções. Objetivo:
O fim deste projeto foi determinar a eficácia na desinfecção do hidrocolóide
irreversível ou alginato, contaminado com Staphylococcus aureus e Candida
albicans quando misturado com clorexidina 0,12%. Materiais e Métodos:
Estudo experimental, in vitro e comparativo, a amostra foi de 40 discos de
alginato, divididos em 2 grupos de estudo (n=20). Procedeu-se a realizar discos
de alginato utilizando para isso clorexidina 0,12% e agua destilada estéril
como controle. Os microrganismos indicadores de desinfecção foram Staphylococcus
aureus e Candida albicans, os quais foram inoculados a 37°C e 25°C
por 24 e 72 horas respectivamente. Para a análise de dados utilizou-se o software Microsoft Excel 2013 e o pacote
estatístico SPSS 23.0, o teste de ANOVA foi aplicado. Resultados: Os
discos de alginato realizados com sustância desinfetante apresentaram halos de
inibição com media de 2,85mm em presencia de Staphylococcus aureus e3,45mm
com Candida albicans, comparados com dos grupo controle com media de 0,05mm com ambos microrganismos. Conclusão:
A eficácia desinfetante no hidrocolóide irreversível misturado com clorexidina
0,12% após ser contaminado com bactérias e fungos é de classe 5, de acordo com
a escala de inibição, o que indica
um nível moderado de desinfecção.
Palavras chave: Desinfecção; hidrocolóide irreversível; alginato;
clorexidina; Staphylococcus aureus; Candida albicans.
Introduccion.
En la práctica odontológica una de las actividades
rutinarias es el procedimiento de toma
de impresión dental, que es el acto de reproducir en negativo determinadas
estructuras de la boca, para lo cual se utiliza diversos materiales de impresión con propiedades específicas
de acuerdo a los requerimientos del profesional, que después de alcanzar cierta
rigidez es llevado a la cavidad bucal con la ayuda de una cubeta, la misma que
permitirá también remover el material después de
cumplida su función. Finalmente se obtiene un modelo, posterior al
vaciado del molde generalmente en yeso o
materiales refractarios, teniendo con esto la reproducción en positivo de la
región copiada. (1)
En este procedimiento el material de impresión entra
necesariamente en contacto con fluidos de la cavidad bucal del paciente como
saliva y en ocasiones sangre, los que pueden contener agentes patógenos
infecciosos que van desde virus potencialmente mortales como el VIH y
hepatitis, hasta otros menos perjudiciales pero que en condiciones de
vulnerabilidad pueden ser de igual peligrosidad, estos son hongos y bacterias
como Cándida albicans y Staphylococcus aureus. (2,3)
Uno de los materiales utilizados para la reproducción
en negativo de superficies es el hidrocoloide irreversible o alginato, que una
vez gelificado por presentar una superficie irregular y poseer gran contenido
acuoso lo convierte en un reservorio de microorganismos, provenientes del contacto
con las estructuras de la boca. (4)
Según lo expuesto por Ribeiro et al (5), Órganos
Internacionales como la Federación Dentaria Internacional (FDI), Asociación
Dental Americana (ADA) y Asociación Dental Británica
(BDA),
manifiestan que los materiales de impresión deben ser sometidos a desinfección
antes de realizar el vaciado en yeso o ser enviados al laboratorio.
Sin embargo, el alginato se ve afectado por acción de
la imbibición y sinéresis haciéndolo más propenso a modificaciones
estructurales, por esta razón la desinfección se debe realizar con mayor
cuidado en comparación con otros materiales que se utilizan para el mismo fin.
(6)
Diferentes sustancias desinfectantes son aplicadas a
las impresiones dentales, de dos maneras: Aspersión e inmersión, sin embargo,
cada uno de estos métodos presentan ciertas desventajas en cuanto al
hidrocoloide irreversible se refiere, como cambios dimensionales e insuficiente
desinfección, respectivamente. (7) De acuerdo a lo anterior se crea la necesidad
de seguir investigando una forma nueva o complementaria de desinfección, siendo la incorporación de un desinfectante a
la mezcla con el alginato, en este caso clorhexidina, una opción prometedora. (8)
Por lo cual en este estudio se busca analizar el grado
de efectividad in vitro de la clorhexidina al 0,12% como desinfectante
del hidrocoloide irreversible contaminado con los microorganismos Staphylococcus
aureus y Cándida albicans, al ser utilizada en la mezcla con el
polvo de alginato en reemplazo del agua común, para la elaboración de impresiones dentales y de esta manera
contar con una nueva alternativa de desinfección, basada en un criterio científico.
Materiales y metodos.
Estudio experimental, in vitro y comparativo.
Se realizó 40 discos de alginato, divididos en 2 grupos, 20 con la sustancia
desinfectante, clorhexidina y 20 con la sustancia control, agua destilada
estéril, a su vez se volvió a dividir en dos grupos más, 10 fueron contaminados
con una batería y 10
con un hongo. Los microorganismos
utilizados, como indicadores de desinfección fueron cepas puras, Staphylococcus
aureus ATCC 25923 y Cándida albicans ATCC 1023.
Para obtener el porcentaje deseado de clorhexidina,
que es 0,12%, se procedió a diluir la presentación de la misma al 2%, en agua
destilada estéril. Posteriormente se realizó la mezcla con el polvo de
alginato, cromático tipo I, tomando especial atención a las indicaciones
recomendadas por el fabricante, tanto para el uso de los dispensadores como el
tiempo de espatulado y gelación. El mismo procedimiento se efectuó con el agua
destilada estéril, el material resultante se esparció sobre una matriz metálica
con agujeros de 10 x 4 mm de diámetro.
Foto N° 1.- a) Paso del
alginato a la matriz metálica. b) Desprendimiento de los discos una vez
gelificado el material.
Foto
N°.- 2 a) y b) Medida del disco 10 mm de circunferencia y 4 mm de altura.
Los
medios de cultivo utilizados para la contaminación de los discos de alginato
son agar Tripticasa Soya, para el crecimiento de Staphylococcus
aureus y agar Sabouraud, para Cándida albicans. La siembra se
efectuó con la cantidad aproximada de 106 unidades formadoras de colonias/ml,
para lo cual se comparó con la escala McFarland al 0,5. Por último se procedió
a tapar las cajas, voltearlas y colocarlas en la incubadora a 37 °C (Staphylococcus
aureus) y a 25°C (Cándida albicans) de 24-72 horas respectivamente.
Después del tiempo indicado cada caja fue examinada
con una lupa, sobre un fondo negro, para verificar el crecimiento o no de
microorganismos sobre y alrededor de los discos de alginato y en el caso de la
presencia de halo, medir el diámetro de la zona de inhibición con la ayuda de
una regla milimetrada. Para interpretar la efectividad lograda, se utilizó los
criterios de la siguiente escala, sugerida por Casemiro L; et al, 2007. (9)
Figura N° 1.- Escala de medición de la zona de
inhibición
Resultados.
Se observan que todos los discos de alginato que
tenían como componente, la sustancia desinfectante clorhexidina al 0,12%,
presentaron halo de inhibición que en promedio para la bacteria Staphylococcus
aureus fue de 2,85 mm y en comparación con los elaborados con agua
destilada
estéril, en cuyo caso uno solo
presento zona de inhibición, dando como promedio 0,05 mm.
|
|
Discos de hidrocoloide
irreversible con clorhexidina 0,12%
|
Discos de hidrocoloide
irreversible con agua
destilada estéril
|
|
Muestras
|
Microorganismos
|
Medida del Halo (mm)
|
Medida
del Halo (mm)
|
|
1
|
Staphylococcus aureus
|
3,00
|
-
|
|
2
|
Staphylococcus aureus
|
2,50
|
-
|
|
3
|
Staphylococcus aureus
|
2,50
|
0,50
|
|
4
|
Staphylococcus aureus
|
3,00
|
-
|
|
5
|
Staphylococcus aureus
|
3,00
|
-
|
|
6
|
Staphylococcus aureus
|
3,00
|
-
|
|
7
|
Staphylococcus aureus
|
3,50
|
-
|
|
8
|
Staphylococcus aureus
|
3,00
|
-
|
|
9
|
Staphylococcus aureus
|
3,00
|
-
|
|
10
|
Staphylococcus aureus
|
2,00
|
-
|
|
|
|
2,85
|
0,05
|
Tabla N° 1.- Medida del halo del Primer
grupo-Staphylococcus aureus
En presencia del hongo Cándida albicans se obtuvo similares resultados a
los mencionados anteriormente, todos los discos con clorhexidina al 0,12% formaron halo de inhibición que en
promedio fue de
3,45 mm, no así el grupo control que únicamente la muestra 3 mostró zona de
inhibición, obteniendo como promedio 0,05 mm.
|
|
|
Discos de hidrocoloide
irreversible con clorhexidina 0,12%
|
Discos de hidrocoloide
irreversible con agua
destilada estéril
|
|
Muestras
|
Microorganismos
|
Medida del Halo (mm)
|
Medida
del Halo (mm)
|
|
1
|
Cándida
albicans
|
3,00
|
-
|
|
2
|
Cándida
albicans
|
3,00
|
-
|
|
3
|
Cándida albicans
|
3,50
|
0,50
|
|
4
|
Cándida
albicans
|
3,50
|
-
|
|
5
|
Cándida albicans
|
4,00
|
-
|
|
6
|
Cándida
albicans
|
3,00
|
-
|
|
7
|
Cándida
albicans
|
3,50
|
-
|
|
8
|
Cándida albicans
|
3,50
|
-
|
|
9
|
Cándida
albicans
|
4,00
|
-
|
|
10
|
Cándida albicans
|
3,50
|
-
|
|
|
|
3,45
|
0,05
|
Tabla N° 2.- Medida del halo del segundo Grupo-Cándida
albicans
Clorhexidina
Agua destilada
estéril
Staphylococcus
aureus
Cándida albicans
Total Staphylococcus
aureus
Cándida albicans
Total
N Media Desviación estándar
95% del intervalo de confianza
|
|
superior
|
|
|
10
|
2,8500
|
,41164
|
0,13017
|
2,5555
|
3,1445
|
2,00
|
3,50
|
|
10
|
3,4500
|
,36893
|
0,11667
|
3,1861
|
3,7139
|
3,00
|
4,00
|
|
20
|
3,1500
|
,48936
|
0,10942
|
2,9210
|
3,3790
|
2,00
|
4,00
|
|
10
|
,0500
|
,15811
|
0,05000
|
-,0631
|
,1631
|
0,00
|
,50
|
|
10
20
|
,0500
,0500
|
,15811
,15390
|
0,05000
0,03441
|
-,0631
-,0220
|
,1631
,1220
|
0,00
0,00
|
,50
,50
|
|
|
Error estándar para la media Mínimo Máximo
Límite inferior Límite
Tabla N° 3.-
ANOVA
Suma de cuadra gl Media cuadrátic F Sig.
|
Clorhexidina
Agua destilada estéril
|
Entre grupos 1,800 1 1,800 11,782 0,003
Dentro de grupos 2,750 18 ,153
Total 4,550 19
Entre grupos 0,000 1 0,000 0 1,000
Dentro de grupos ,450 18 ,025
Total ,450 19
|
|
El valor de significancia P (0,003) < 0,05
|
Tabla N°4.- Resumen de contrastes de hipótesis ANOVA
Para la primera variable clorhexidina al 0,12%, el
valor de significancia de P fue 0,003 menor a la probabilística de 0,05, por lo
tanto se rechaza la hipótesis nula y se acepta la alternativa. Sin embargo, en
el caso de la segunda variable el valor de significancia obtenido (1,000) es
mayor al valor máximo de P, motivo por el cual acepta la nula y rechaza la alternativa.
Figura N° 2 .- Cultivos con los discos de alginato más clorhexidina al
0,12% a la derecha, formando el halo de inhibición y discos con agua destilada
estéril a la izquierda, sin presencia de
halo.
Discusión.
En este proyecto investigativo in vitro, se
optó por utilizar gluconato de clorhexidina a una concentración del 0,12%,
utilizado comúnmente para enjuague bucal, tomando en cuenta como contaminantes
del material de impresión, una bacteria Staphylococcus aureus ATCC 25923
y un hongo Cándida albicans ATCC 10231.
El porcentaje utilizado demostró causar desinfección
en el hidrocoloide irreversible produciendo un efecto inhibitorio sobre el
crecimiento de los microorganismos considerados, formando halos de inhibición
en todas las muestras con presencia del desinfectante, que en promedio para el Staphylococcus
aureus fue: 2,85 mm y para la Cándida albicans: 3,45 mm.
Similares resultados fueron obtenidos en el estudio
realizado por De Azevedo G; et al, 2014, (10), quienes utilizaron el mismo
porcentaje de la sustancia desinfectante para la mezcla con el
alginato,
procediendo a probarlo en paciente, con lo que se pudo observar la disminución
de la carga microbiana, después del contacto del material de impresión con la
cavidad bucal.
Por otro lado el grupo control que son discos de
alginato elaborados con agua destilada estéril, presentaron mínima desinfección
que en promedio para ambos microrganismos fue de; 0,05 mm. Resultados que
coinciden con el estudio de Casemiro L; et al, 2007, (9) en los que también se
registraron pequeñas zonas de inhibición en el grupo control. Esto se atribuye
a la presencia de agentes químicos en el alginato que pudieran causar mínima
inhibición. Lo que ocasionó, que de acuerdo a la escala ocupen rangos de entre
1 y 3, interpretándose como nivel NULO, MUY LEVE y LEVE de desinfección.
Se evidenció la existencia de un valor atípico, en las
muestras número tres con los disco elaborado con agua destilada estéril,
contaminados tanto con Staphylococcus aureus como con Cándida
albicans; lo que significa que un dato de la muestra de 10 con cada
microorganismo, presentó una medición del halo de inhibición que despunta a la
media de los datos de muestra, evidenciando un valor de 0,5 mm (mayor al
promedio). Dentro de esta investigación se consideró a este dato como parte de
la normalidad, debido a que se trabajó con 10 repeticiones para cada
microorganismo de estudio. Si el número de repeticiones aumente, este valor de
lectura se duplicará en más placas y en una muestra más grande, el dato ya no
se consideraría atípico.
El microorganismo que presento mayor sensibilidad en
este estudio fue la Cándida albicans, sin embargo esto diverge del
estudio de Casemiro L; et al, 2007, (9) quienes encontraron que el de mayor
susceptibilidad era Staphylococcus aureus. Esto se puede explicar por el
hecho de que las poblaciones bacterianas de la misma especie se comportan de
manera diferente cuando se trata de
antimicrobianos, debido principalmente a la presencia de resistencia
causada por mutación u otros mecanismos genéticos. No así, los presentes
resultados concuerdan con los encontrados en la investigación de Alwahab Z,
2012, (7) en el que también destaca con mayor susceptibilidad la Cándida
albicans en comparación con el Staphylococcus aureus.
En conclusión las medidas de los halos de inhibición
que formó el desinfectante mezclado con el hidrocoloide irreversible, en los
cultivos con los microorganismos, los ubicaron de acuerdo a la escala, en el
rango número 5 que indica nivel de desinfección MODERADO. Comprobando con esto
que la clorhexidina logra efectividad desinfectante en el hidrocoloide
irreversible y corrobora a otros estudios que sugieren a este método de
desinfección como eficaz para la eliminación de patógenos que se incorporan en
el material, en el momento del procedimiento de toma de impresión dental,
disminuyendo de esta manera el riesgo biológico que implica la manipulación del
mismo.
Conclusiones.
En promedio la medida del halo de inhibición de
crecimiento microbiano que se obtuvo alrededor del hidrocoloide irreversible
mezclado con clorhexidina al 0,12%, fue de 2,85 mm para el Staphylococcus
aureus y 3,45 mm en el caso de la Cándida albicans, que acorde a la
escala de inhibición los ubica en el
rango 5, lo que se traduce en un
nivel moderado de desinfección.
Para los discos de hidrocoloide irreversible mezclados
con agua destilada estéril, la media estadística fue 0,05 mm, que los ubicaron
en el grado 1, 2 y 3, esto de acuerdo a la escala de inhibición se interpreta
como nivel nulo, muy leve y leve de acción desinfectante.
Los discos que contenían la sustancia desinfectante, clorhexidina al
0,12%, mostraron mayor nivel de desinfección en comparación con los elaborados
con agua destilada estéril.
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