Ciencias de la salud

Artculo de investigacin

 

COVID-19 Implicaciones e interpretacin de la seropositividad/negatividad en pruebas de diagnstico molecular y serolgicas

 

COVID-19 Implications and interpretation of seropositivity / negativity in molecular and serological diagnostic tests

 

COVID-19 Implicaes e interpretao da soropositividade / negatividade em testes de diagnstico molecular e sorolgico

 

Johana Magali Enrquez-Ipial I

[email protected]

https://orcid.org/0000-0002-2151-9632

 

Melany Joely Reyes-Tumbaco II

[email protected]

https://orcid.org/0000-0001-6453-6363

 

Edison Gastn Pincay-Parrales III

[email protected]

https://orcid.org/0000-0001-6161-3327

 

Correspondencia: [email protected]

 

*Recibido: 28 de mayo del 2021 *Aceptado: 25 de junio del 2021 * Publicado: 02 de julio del 2021

       I.            Egresada de la Carrera de Laboratorio Clnico, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Estatal del Sur de Manab, Jipijapa, Ecuador.

    II.            Egresada de la Carrera de Laboratorio Clnico, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Estatal del Sur de Manab, Jipijapa, Ecuador.

III.            Licenciado en Laboratorio Clnico, Magister en Gerencia Hospitalaria, Carrera de Laboratorio Clnico, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Estatal del Sur de Manab, Jipijapa, Ecuador.

 

Resumen

COVID-19 causado por el Sndrome Respiratorio Agudo Grave, representa para el mundo la enfermedad de mayor crecimiento en la actualidad, el desafo fundamental lo representan las infraestructuras de diagnsticos como el mecanismo principal de contencin por lo cual detectar su presencia constituye una actividad importante. Diversos han sido los mtodos de diagnsticos empleados, existiendo diferencia entre los test utilizados en cuanto a especificidad y sensibilidad es por ello que el objetivo de esta investigacin se enfoca en determinar implicaciones e interpretacin de la seropositividad/negatividad en pruebas de diagnstico molecular y serolgicas para la COVID-19, este estudio es de tipo descriptivo, observacional, de corte transversal, mtodo bibliogrfico, para obtener la informacin se recurri a los buscadores y plataformas como SciELO, MEDLINE, Google Scholar, medRxiv y PubMed, se emple el uso de boleano AND, descartando el uso de or, como resultado de la investigacin se logr documentar que RT-PCR (Reaccin de Cadena de polimerasa con transcriptasa inversa) detecta y amplifica una o varias regiones especficas del virus, cuenta con estudios que han demostrado alta sensibilidad para el diagnstico con una tasa de aciertos del 95% y sin reactividad cruzada con otros virus y coronavirus, sin embargo, los ensayos serolgicos, son aquellos que permiten detectar los anticuerpos (IgM, IgG o IgA) generados como parte de la respuesta inmune del individuo contra el virus SARS-CoV-2. Se concluye que la combinacin de ambas tcnicas, permite conocer la presencia del virus y la etapa en la que se encuentra la infeccin.

Palabras claves: SARS-CoV-2; RT-PCR; anticuerpos; antgenos; virus.

Abstract

COVID-19, caused by severe acute respiratory syndrome, represents the fastest growing disease in the world today, the fundamental challenge is represented by the diagnostic infrastructures as the main containment mechanism for which detecting its presence constitutes an important activity. The diagnostic methods used have been diverse, and there is a difference between the tests used in terms of specificity and sensitivity, which is why the objective of this research focuses on determining the implications and interpretation of seropositivity / negativity in molecular and serological diagnostic tests for COVID-19 , this study is of a descriptive, observational, cross-sectional, bibliographic method, to obtain the information, search engines and platforms such as SciELO, MEDLINE, Google Scholar, medRxiv and PubMed were used. boolean "AND", discarding the use of "or", as a result of the research it was possible to document that RT-PCR (Polymerase Chain Reaction with reverse transcriptase) detects and amplifies one or several specific regions of the virus, has studies that have shown high sensitivity for diagnosis with a 95% success rate and no cross-reactivity with other viruses and coronaviruses s, however, serological tests are those that make it possible to detect the antibodies (IgM, IgG or IgA) generated as part of the individual's immune response against the SARS-CoV-2 virus. It is concluded that the combination of both techniques allows knowing the presence of the virus and the stage of the infection.

Keywords: SARS-CoV-2; RT-PCR; antibodies; antigens; viruses.

 

Resumo

A COVID-19, causada pela Sndrome Respiratria Aguda Grave, representa a doena de crescimento mais rpido no mundo hoje, o desafio fundamental representado pelas infra-estruturas de diagnstico como o principal mecanismo de conteno para o qual a deteco da sua presena constitui uma atividade importante. Os mtodos diagnsticos utilizados tm sido diversos, existindo uma diferena entre os testes utilizados em termos de especificidade e sensibilidade, razo pela qual o objetivo desta pesquisa se concentra em determinar as implicaes e interpretao da soropositividade / negatividade em testes diagnsticos moleculares e sorolgicos para COVID-19 , este estudo de um mtodo descritivo, observacional, transversal, bibliogrfico, para obteno das informaes, foram utilizados buscadores e plataformas como SciELO, MEDLINE, Google Scholar, medRxiv e PubMed. Booleano" AND ", descartando o uso de "ou", como resultado da pesquisa foi possvel documentar que a RT-PCR (Reao em Cadeia da Polimerase com Transcriptase Reversa) detecta e amplifica uma ou vrias regies especficas do vrus, possui estudos que tm demonstrado alta sensibilidade para diagnstico com uma taxa de sucesso de 95% e nenhuma reatividade cruzada com outros vrus e coronavrus Porm, os testes sorolgicos so aqueles que permitem detectar os anticorpos (IgM, IgG ou IgA) gerados na resposta imunolgica do indivduo contra o vrus SARS-CoV-2. Conclui-se que a combinao das duas tcnicas permite conhecer a presena do vrus e o estgio da infeco.

Palavras-chave: SARS-CoV-2; RT-PCR; anticorpos; antgenos; vrus.

 

 

 

Introduccin

El Sndrome Respiratorio Agudo Severo (SARS CoV-2), agente del COVID-19, al igual que otros coronavirus, su envoltura presenta una glicoprotena en forma de espcula (protena S), adosada a la cpside que le da aspecto de corona. La protena S garantiza la interaccin entre el virus y la clula diana del paciente para su transmisin (1) La figura 1 muestra un esquema con la estructura del agente patolgico.

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Figura 1: Composicin del agente patolgico SARS-CoV-2.

 

COVID- 19 es responsable de una importante morbilidad y mortalidad a nivel mundial, la cual ha sido abordada por la ciencia desde diferentes perspectivas, tales como aspectos sanitarios, sociales y econmicos, provocando una gran expansin global y un gran nmero de personas contagiadas debido a la alta tasa de transmisibilidad del virus que, si bien, en la mayora de estas personas los sntomas son leves, no es menor la cantidad de personas que pueden agravarse, y as, poner en jaque los sistemas de salud.

Segn la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) la pandemia generada por COVID-19 afecta casi al 90% de la poblacin del mundo (2).

La elevada letalidad del virus ha enfatizado la importancia del diagnstico de laboratorio de las infecciones por coronavirus humano para limitar la propagacin y tratar adecuadamente a los pacientes que tienen una infeccin grave, por ende, existen mtodos para la deteccin de SARS-CoV-2: PCR o prueba de la reaccin en cadena de la polimerasa, se basa en tecnologa molecular de deteccin y amplificacin de cidos nucleicos. Utiliza el material gentico ARN del SARS-CoV-2 en distintas muestras biolgicas clnicas para la identificacin (3) El PCR representa la tcnica de referencia para el diagnstico de COVID-19 (4)

Para la implementacin del PCR se sigue un flujo de trabajo compuesto por las siguientes siete actividades: diagnstico clnico; recogida de la muestra; recepcin y manipulacin de la muestra; extraccin de cido ribonucleico; reaccin en cadena de la polimerasa; amplificacin y deteccin; y por ltimo la formulacin y expresin de los resultados.

PCR es til en las tres primeras semanas de infeccin y es el estndar de referencia recomendado por la OMS.

El segundo criterio de diagnstico es mediante la deteccin de los anticuerpos producidos por el sistema inmunitario de los pacientes, Con el objetivo de identificar anticuerpos IgM e IgG, se aplican diferentes tcnicas como: ELISA, CLIA, inmunocromatogrfica, entre otras. La prueba serologicas consiste en detectar la presencia de anticuerpos IgM e IgG frente SARS-CoV-2 en una muestra de sangre, suero o plasma. Hay test que detectan los anticuerpos totales y otros que diferencian entre las IgM e IgG y pueden detectar aisladamente IgG o IgM o ambas.

Para la implementacin de la prueba serologicas al igual que el PCR se sigue un flujo de trabajo que parte del diagnstico clnico; recogida de la muestra; recepcin y manipulacin de la muestra; procesamiento; formulacin y expresin de los resultados.

El test antgeno Inmunocromatogrfico se realiza para la obtencin de un diagnstico rpido, aunque estudios realizados confieren baja sensibilidad. Por su parte el test de anticuerpos inmunocromatogrfico busca la identificacin en el sistema inmunolgico de los anticuerpos IgG-IgM.

No obstante, estas tcnicas de diagnstico poseen funcionamiento y caractersticas que lo singularizan. Sin embargo, cada prueba desarrollada posee disimilitud. Entonces, Qu prueba diagnstica es ms eficaz para la deteccin de SARS-CoV-2? teniendo en cuenta que se impone un reto para la comunidad cientfica en funcin de hacer frente a la gran necesidad de tecnologas de diagnstico con sensibilidad, precisin y rapidez.

Se necesita evidencia cientfica adicional para evaluar la precisin y confiabilidad de las pruebas diagnsticas disponibles (pruebas moleculares y serolgicas). Aunque estas pruebas podran resultar tiles, su precisin necesita validacin dado el potencial de propagacin de la enfermedad, se debe conocer muy bien su desempeo analtico y clnico, as como tambin considerar los posibles falsos positivos, falsos negativos a la hora de la interpretacin (5).

La revisin bibliogrfica, se basa en literatura cientfica disponible que responda fundamentalmente al objetivo: Determinar implicaciones e interpretacin de la seropositividad/negatividad en pruebas de diagnstico molecular y serolgicas para la COVID-19. Puesto que, hace ms efectivo el diagnstico, tratamiento y permite priorizar recursos sanitarios que en la actualidad no cubren todas las demandas.

 

Metodologa

Tipo y diseo de estudio

Estudio de tipo descriptivo, observacional, de corte transversal, mtodo bibliogrfico.

Para obtener la informacin se recurri a los buscadores y plataformas como SciELO, MEDLINE, Google Scholar, medRxiv y PubMed, se utilizaron los trminos Mesh Diagnostic SARS-CoV-2, Seropositividad SARS-CoV-2, Implicaciones SARS-CoV-2, Serologic SARS-CoV-2, Pruebas moleculares SARS-CoV-2, se emple el uso de boleano AND, descartando el uso de or.

Se identificaron artculos de revistas adicionales a partir de las bibliografas de los estudios incluidos.

 

Criterios de inclusin

Los criterios de inclusin fueron artculos provenientes de todos los pases, publicados durante los ltimos meses despus de la aparicin del SARS-CoV-2. En idiomas espaol e ingls, se incluyeron el anlisis todos los estudios originales que informaban sobre Implicaciones e interpretacin de SARS-CoV-2 como estudios de casos, estudios comparativos.

 

Criterios de exclusin

Los criterios de exclusin fueron artculos relacionados con otra metodologa de diagnstico como estudios complementarios (Tomografas, rayos X, entre otros).

 

 

Resultados

Hasta el momento existe una amplia diversidad de mtodos para el diagnstico de SARS-CoV-2, sin embargo, los sistemas de salud del mundo toman como referencia a Reaccin de Cadena de polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) que es una prueba de biologa molecular en la que se detecta y amplifica una o varias regiones especficas del virus y cuenta con estudios que han demostrado alta sensibilidad para el diagnstico con una tasa de aciertos del 95% y sin reactividad cruzada con otros virus y coronavirus. En este mtodo la recoleccin de muestras es de las vas respiratorias superiores a travs de hisopados nasofarngeos u orofarngeos, ya que proveen mayor carga viral. Sin embargo, en las muestras orofarngeas hay mayor probabilidad de presentar falsos positivos/negativos. Hasta el momento se ha podido determinar que el virus puede ser detectado desde al menos 48 horas antes del inicio de sntomas (presintomticos) y hasta 12-14 das (al menos 6-7 das) en muestras del tracto respiratorio superior (hisopado naso/orofarngeo) y hasta por 20 das (o ms) en muestras del tracto respiratorio inferior incluyendo esputo, aspirado traqueal, lavado bronquioalveolar, etc.

Por otro lado, los ensayos serolgicos, son aquellos que permiten detectar los anticuerpos (IgM, IgG o IgA) generados como parte de la respuesta inmune del individuo contra el virus SARS-CoV-2. La presencia de los anticuerpos est relacionada con el momento en que se realiza la prueba. La IgA es el primer anticuerpo frente a la infeccin aparece a los 4-5 das del inicio de la infeccin, la IgM aparece a los 6-7 das del inicio de la infeccin y se detecta mayor positividad a los 15 das, relativizndose alrededor del da 20 desde el inicio de los sntomas, la IgG confiere probable inmunidad, aparece aproximadamente a los 15 das del inicio de la infeccin.

Las tcnicas recomendadas son Enzimoinmunoensayo (ELISA) y Quimioluminiscencia (CLIA) por sus altos niveles de sensibilidad y especificidad. Otra tcnica que se usa es la Inmunocromatografia que por ende son muy fciles de realizar ya que detectan, en un solo paso, los anticuerpos contra el virus, sin embargo, tienen un rendimiento diagnstico bajo en comparacin con los ensayos ELISA, por lo cual pueden contribuir an ms a los resultados falsos negativos observados en las pruebas rpidas. Estos ensayos nos permiten estudiar al SARS-CoV-2 en individuos que han sido husped del virus, inclusive cuando estos han sido asintomticos durante la infeccin. Para estas pruebas se puede utilizar muestras de suero, plasma o sangre total, son complementarias y no sustituyen la deteccin del material gentico viral por RT-PCR, por lo general se debe tomar la muestra a pacientes con sntomas leves (nunca antes de 10 das de inicio de los sntomas).

La deteccin de antgenos es un diagnostico alternativo el cual busca protenas del virus, el mejor desempeo de estas pruebas se observa en pacientes con elevada carga viral ( 25 o copias de genoma viral >106 /mL), que generalmente aparece en pacientes pre-sintomticos (1-3 das) o en las fases sintomticas tempranas de la enfermedad (primeros 5-7 das), su deteccin puede ser usada como criterio de confirmacin, por lo cual un resultado negativo no debe ser usado como criterio para descartar un caso, ya que no se ha establecido la dinmica de produccin, excrecin de antgenos, se indican muestras de secrecin respiratorias(nasofarngeas) para este mtodo.

A continuacin, se evala los criterios de seropositividad/ negatividad e implicaciones en la interpretacin de las pruebas de diagnstico para SARS-CoV-2

Tabla 1: Criterios de positividad y negatividad de Reaccin de Cadena Polimerasa con Transcriptasa Inversa (RT-PCR).

TIPO DE PRUEBA

CRITERIOS DE POSITIVIDAD/ NEGATIVIDAD

FALSO POSITIVOS

FALSOS NEGATIVOS

N DE REFERENCIA

PRUEBA DE BIOLOGIA MOLECULAR

 

Reaccin de Cadena Polimerasa con Transcriptasa Inversa

(RT-PCR)

   Se detecta desde al menos 48 horas antes del inicio de sntomas.

   Hasta 12-14 das (al menos 6-7 das) en muestras del tracto respiratorio superior (hisopado naso/orofarngeo).

   Hasta por 20 das (o ms) en muestras del tracto respiratorio inferior incluyendo esputo, aspirado traqueal, lavado bronquio alveolar, etc.

   La calidad de la muestra puede provocar casos de falsos negativos al no contener virus o poseer una cantidad importante de inhibidores de las reacciones enzimticas.

     Error preanaltico en el etiquetado de la muestra a lo largo del proceso.

       Contaminacin cruzada entre muestras durante el procesamiento.

       Virus inactivos y los fragmentos virales.

       La recogida de la muestra es inadecuada (cantidad escasa).

       Reinfecciones con COVID-19 (probablemente las personas que logren generar anticuerpos contra este coronavirus en particular les van a generar proteccin por largo tiempo.

       El medio y la temperatura de trasporte de la muestra (asociados al tiempo que transcurre entre la toma y el anlisis presencia de inhibidores se asocia en mayor medida con los materiales).

       Presencia de inhibidores (deben ser de materiales compatibles para el trabajo con PCR, pues pueden contener sustancias inhibidoras de la reaccin de PCR, hisopos de algodn pueden causar falsos negativos debido a que absorben clulas y viriones, que son de difcil liberacin para la extraccin del material, por lo que se recomiendan hisopos de dacrn y rayn).

(6), (7) , (8), (10), (9), (10), (11), (12).

 

 

TIPO DE PRUEBA

CRITERIOS DE POSITIVIDAD/ NEGATIVIDAD

FALSO POSITIVOS

FALSOS NEGATIVOS

N DE REFERENCIA

 

PRUEBAS SEROLOGICA

(Deteccin de los antgenos)

 

       Fase presintomtica: 1-3 das antes de la de aparicin de sntomas.

       Fase sintomtica: dentro de los primeros 5 a 7 das

       Tiempos superiores a 5-7 das tras la aparicin de los sntomas suponen menores cargas virales y aumento de probabilidad de falsos negativos.

       Puede producirse un resultado negativo de la prueba si la muestra se recogi, extrajo o transport incorrectamente.

       Un resultado negativo de la prueba no elimina la posibilidad de infeccin por SARS-CoV-2 y debe confirmarse mediante cultivo viral o un ensayo molecular o ELISA.

       La lectura de resultados de la prueba antes de 15 minutos o despus de 20 minutos puede dar resultados incorrectos.

     Condiciones derivadas del paciente y la tcnica (antgenos y principio tcnico empleado).

     Contaminacin de la muestra o prueba mal realizada.

     Enfermedades neoplsicas (sobre todo del sistema hematopoytico) y autoinmunes aumentan (el riesgo de obtener un resultado falso positivo como consecuencia de dichas reacciones cruzadas).

 

       Tiempos superiores a 5-7 das despus del inicio de los sntomas significan cargas virales ms bajas y una mayor probabilidad de resultados falsos negativos

       Reaccin cruzada con otros coronavirus humanos y otros virus.

       Bajas concentraciones de anticuerpos.

       La calidad de la muestra puede provocar casos de falsos negativos al no contener virus o poseer una cantidad importante de inhibidores de las reacciones enzimticas.

 

(13), (14), (15), (16).

Tabla 2: Criterios de positividad y negatividad en deteccion de antgenos.

 

Tabla 3: Criterios de positividad y negatividad en deteccion de anticuerpos IgM-IgG, mtodo de ELISA.

TIPO DE PRUEBA

CRITERIOS DE POSITIVIDAD/ NEGATIVIDAD

FALSO POSITIVOS

FALSOS NEGATIVOS

N DE REFERENCIA

 

ELISA

(Deteccin de anticuerpos IgM y IgG)

      Esta prueba solo es adecuada para la deteccin cualitativa.

      Durante la primera semana desde el inicio de la infeccin por el nuevo coronavirus (COVID-19), es posible que los resultados de los pacientes sean negativos para IgM-IgG. Adems, los pacientes con una baja inmunidad u otras enfermedades que afecten a la funcin inmune, fallo de rganos sistmicos importantes y uso de frmacos inhibidores de la funcin inmune tambin pueden obtener resultados negativos para IgM del nuevo coronavirus.

  Condiciones derivadas del paciente y la tcnica (antgenos y principio tcnico empleado).

  Contaminacin de la muestra o prueba mal realizada.

Enfermedades neoplsicas (sobre todo del sistema hematopoytico) y autoinmunes aumentan (el riesgo de obtener un resultado falso positivo como consecuencia de dichas reacciones cruzadas).

    Reaccin cruzada con otros coronavirus humanos y otros virus.

    Bajas concentraciones de anticuerpos.

    Los falsos negativos estn principalmente asociados al curso natural de la enfermedad dependiendo de la respuesta inmune individual.

    Si la prueba se realiza antes de los primeros 11 das luego del inicio de los sntomas es probable que arroje falsos negativos por que las concentraciones de anticuerpos en sangre no son detectadas, dependiendo de la gravedad de la enfermedad

(17), (18),(19) (20), (21) , (22).

 

 

Tabla 4: Criterios de positividad y negatividad en deteccin de anticuerpos IgG- IgM, mtodo Quimioluminiscencia.

TIPO DE PRUEBA

CRITERIOS DE POSITIVIDAD/ NEGATIVIDAD

FALSO POSITIVOS

FALSOS NEGATIVOS

N DE REFERENCIA

 

 

QUMIOLUMINISENCIA

(Deteccin de anticuerpos IgM y IgG)

 

  Puede producirse un resultado negativo si la cantidad de anticuerpos para el virus SARS-CoV-2 presentes en la muestra est por debajo del lmite de deteccin del ensayo, o el virus ha sufrido mutaciones menores de aminocidos en el eptopo reconocido por el anticuerpo detectado por la prueba.

  Los anticuerpos IgM e IgG del SARS-CoV-2 pueden estar por debajo de los niveles detectables en pacientes que han presentado sntomas durante menos de 8 das

  Los anticuerpos heterofilos presentes en el suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas del reactivo e interferir en los inmunoanalisis in vitro.

  Condiciones derivadas del paciente y la tcnica (antgenos y principio tcnico empleado).

  Contaminacin de la muestra o prueba mal realizada.

       Enfermedades neoplsicas (sobre todo del sistema hematopoytico) y autoinmunes aumentan (el riesgo de obtener un resultado falso positivo como consecuencia de dichas reacciones cruzadas).

   Reaccin cruzada con otros coronavirus humanos y otros virus.

   Bajas concentraciones de anticuerpos.

   Los falsos negativos estn principalmente asociados al curso natural de la enfermedad dependiendo de la respuesta inmune individual.

   Si la prueba se realiza antes de los primeros 11 das luego del inicio de los sntomas es probable que arroje falsos negativos por que las concentraciones de anticuerpos en sangre no son detectadas, dependiendo de la gravedad de la enfermedad.

(8) , (15) , (18), (23),(22), (24),(25).

 

Tabla 5: Criterios de positividad y negatividad en deteccion de anticuerpos IgG-IgM, mtodo de flujo lateral inmunocromatogrfico.

TIPO DE PRUEBA

CRITERIOS DE POSITIVIDAD/ NEGATIVIDAD

FALSO POSITIVOS

FALSOS NEGATIVOS

N DE REFERENCIA

ENSAYOS DE FLUJO LATERAL INMUNOCROMATOGRFICO

(Deteccin de anticuerpos IgM y IgG)

 

         Anticuerpos IgM: aparece generalmente 1 semana despus de la infeccin, con los ttulos hasta 1-3 meses y a partir de los 9 meses puede tener ttulos persistentes hasta por 2 o ms aos.

         Anticuerpos IgG: aparece a partir de las 2 semanas de infeccin llegando a los 3 meses, se mantiene por 6 meses y luego de 1 ao inicia un lento descenso hasta llegar a su nivel ms bajo, la avidez de estos anticuerpos IgG aumenta progresivamente durante los primeros 4 meses post infeccin

  Condiciones derivadas del paciente y la tcnica (antgenos y principio tcnico empleado).

  Contaminacin de la muestra o prueba mal realizada.

  Enfermedades neoplsicas (sobre todo del sistema hematopoytico) y autoinmunes aumentan (el riesgo de obtener un resultado falso positivo como consecuencia de dichas reacciones cruzadas).

       Reaccin cruzada con otros coronavirus humanos y otros virus.

       Bajas concentraciones de anticuerpos.

       Sangre capilar, si bien en este caso la sensibilidad es menor y la posibilidad de encontrar falsos negativos mayor.

       Los falsos negativos estn principalmente asociados al curso natural de la enfermedad dependiendo de la respuesta inmune individual.

       Si la prueba se realiza antes de los primeros 11 das luego del inicio de los sntomas es probable que arroje falsos negativos por que las concentraciones de anticuerpos en sangre no son detectadas, dependiendo de la gravedad de la enfermedad.

(5), (26),(27), (8), (28) (29),(30).

 

Tabla 6: Interpretacin de Reaccin de Cadena Polimerasa con Transcriptasa Inversa.

TIPO DE PRUEBA

LIMITACION DE LA PRUEBA

INTERPRETACION

N DE REFERENCIA

PRUEBA DE BIOLOGIA MOLECULAR

 

Reaccin de Cadena Polimerasa con Transcriptasa Inversa

(RT-PCR)

 

 

    Alta carga viral (entre 104 y 108 copias de genoma/ml por muestra nasofarngea)

    En algunos pacientes se detecta virus ms all del da 10, la carga viral es del orden de 100-1.000 veces menor.

         RT-PCR se hace negativa a partir del da 8 desde el inicio de los sntomas en muestras nasofarngeas y a partir de ah y hasta mximo el da 22 slo sera positiva en muestras de esputo (vas respiratorias bajas).

   En casos positivo se debe:

     Tomar segunda muestra a los 14 das (positivo)

     Tercera muestra: 21 das(positivo)

     Cuarta muestra:28 das posterior a la fecha de inicio de sntomas.

(31), (13), (14), (32).

 

Tabla 7: Interpretacin de deteccin de antgenos.

TIPO DE PRUEBA

LIMITACION DE LA PRUEBA

INTERPRETACION

N DE REFERENCIA

 

PRUEBAS SEROLOGICA

(Deteccin de los antgenos)

         Elevada carga viral

(>106 copias del genoma vrico/ml)

         Resultado negativo: presencia de control (C) y ninguna lnea de prueba (T) indica un resultado negativo)

         Resultado positivo: presencia de la lnea de prueba(T) y lnea de control (C) indica un resultado positivo.

(14),(15),(16), (22).

 

TIPO DE PRUEBA

INTERPRETACION

N DE REFERENCIA

 

ELISA

(Deteccin de anticuerpos IgM y IgG)

 

IgM

         Negativo: La muestra no contiene anticuerpos IgM

         Positivo La muestra contiene nuevos anticuerpos IgM

IgG

         Negativo: La muestra no contiene anticuerpos IgG

         Positivo La muestra contiene nuevos anticuerpos IgG

(8), (30), (33)

 

Tabla 8: Interpretacin de deteccin de anticuerpos mtodo de ELISA.

 

Tabla 9: Interpretacin de deteccion de anticuerpos mtodo de Quimioluminiscencia.

TIPO DE PRUEBA

INTERPRETACION

N DE REFERENCIA

 

QUMIOLUMINISENCIA

(Deteccin de anticuerpos IgM y IgG)

         Negativo: resultado inferior a 1,00 AU / mL (<1,00 AU / mL).

         Positivo: un resultado mayor o igual a 1,00 AU / mL (≥1,00 AU / mL) se considera reactivo.

(13), (34),(35).

 

 

 

Tabla 10: Interpretacin de deteccion de anticuerpos mtodo de Ensayos de flujo lateral inmunocromatogrfico.

TIPO DE PRUEBA

INTERPRETACION

N DE REFERENCIA

 

ENSAYOS DE FLUJO LATERAL INMUNOCROMATOGRFICO

(Deteccin de anticuerpos IgM y IgG)

 

         IgG positivo: lnea de color en la regin de la lnea de control (C) y otra lnea debe estar en la regin de la lnea IgG.

         IgM positivo: lnea de color en la regin de la lnea de control (C) y otra lnea debe estar en la regin de la lnea de IgM.

         IgG e IgM positivas: lnea de control (C) y dos lneas de prueba debe estar en la regin de la lnea IgG y en la regin de la lnea IgM.

         Negativo: lnea de control (C). No aparece ninguna lnea en la regin de IgG y en la regin de IgM.

         Invlido: La lnea de control no aparece. 

(14), (36), (37), (21).

 

 

 

Discusin

De acuerdo artculos provenientes de pases como Wuhan, China, Cuba, Espaa, Peru, Arabia Saudita, Espaa, se emplean diversos mtodos de diagnstico, tales como: pruebas de antgeno que buscan las protenas del virus, pruebas moleculares que detectan cido nucleico del virus y las pruebas serolgicas que indican la exposicin y la probable infeccin, pero en si cumpliendo un papel importante a la hora del diagnstico.

RT-PCR presentan una elevada especificidad y sensibilidad, sin embargo, estudios realizados en Wuhan: (6), (7), (11), (24), Estados Unidos: (12), (38), China: (10) , Cuba: (35), demuestran que dicha prueba no debe considerarse como el nico indicador de diagnstico para pacientes con SARS-CoV-2, ya que se ha descrito que la cantidad de partculas virales (carga viral) detectables mediante esta tcnica es mxima dentro de los primeros 7 das de la infeccin, si bien los cidos nucleicos virales pueden ser detectados tambin en fases posteriores. Un porcentaje variable de pacientes puede dar resultados negativos aun estando infectados, debido a distintos factores asociados con la dinmica de la carga viral y con la obtencin y procesamiento de la muestra.

Estudios realizados en Estados Unidos: (18), (22), Madrid-Espaa: (39) Per: (5), (28), Hong Kong: (17), Venezuela: (20), India: (23), demuestran que las pruebas serolgicas son concluyentes por dos razones: primero porque complementan la eficacia diagnstica de la PCR en segundo lugar, porque da a conocer el momento de la infeccin o la convalecencia en que se encuentra el sujeto infectado. La combinacin de ambas tcnicas, deteccin de cidos nucleicos y anticuerpos permite conocer la presencia del virus y si la infeccin est en etapas iniciales o bien ya ha transcurrido un cierto tiempo. Por otro lado, la cuantificacin e identificacin de los tipos de anticuerpos producidos permiten caracterizar la respuesta generada por el paciente frente a la enfermedad.

Por otra parte, los resultados del presente estudio en comparacin a los resultados de la investigacin se determinan que RT-PCR demuestra una elevada especificidad y sensibilidad a la hora de detectar la presencia directa del virus, mas no indicando el momento de la infeccin en la que se encuentra. Sin embargo, la generacin de distintos tipos de anticuerpos (IgM, IgG) por parte del sistema inmunitario ayuda a identificar el momento del proceso infeccioso en que se encuentra el paciente. De tal manera que se han desarrollado pruebas serolgicas para la deteccin de anticuerpos anti-SARS-CoV-2.

Las tcnicas recomendadas son Enzimoinmunoensayo (ELISA) o Quimioluminiscencia (CLIA), por sus altos niveles de sensibilidad y especificidad. Las pruebas serolgicas son cruciales por tres motivos:

1.      Complementan la eficacia diagnstica de RT-PCR.

2.      Proporcionan informacin valiosa para aproximar temporalmente el momento de la enfermedad en la que se encuentra el sujeto (IgM e IgA: detectados fundamentalmente en etapas tempranas de la infeccin; IgG: detectados a partir de la segunda semana de infeccin).

3.      Permiten la realizacin de estudios de prevalencia de la enfermedad en la poblacin o en colectivos de inters.

Cada vez se conoce ms al respecto, pero faltan estudios que detallen toda esta informacin, ya que existe una gran variabilidad en diferentes poblaciones de asintomticos y sintomticos, entre los cuales vara de acuerdo con la severidad, comorbilidades, edad, historial de infeccin, entre otros factores.

 

Conclusin

Se disponen pruebas para la determinacin de SARS-CoV-2: pruebas directas (Reaccin en Cadena Polimerasa con transcriptasa inversa)RT-PCR las cuales estn diseadas para detectar el virus y, por lo tanto, reflejan la infeccin actual; y las pruebas indirectas que detectan los anticuerpos y determinan la seroconversin establecida a una infeccin previa, teniendo en cuenta los criterios que se deben cumplir a la hora de realizar dichas determinaciones como recoleccin de muestra, tipo de muestra, tiempo de recoleccin en relacin al curso de la enfermedad.

Comparando la prueba de reaccin en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR), prueba de deteccin de antgenos y prueba de deteccin de anticuerpos combinados IgG e IgM mostr buena especificidad (entre 99-100%), sin embargo, en sensibilidad dichas pruebas presentan variabilidad, depender de la carga viral y de manera esencial de la correcta toma de la muestra, del da de toma de muestra, tipo de muestra, conservacin, transporte al laboratorio a la temperatura adecuada y el estadio clnico en el que se encuentre el paciente.

 

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